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        ATCC細胞解凍和培養指南
        作者:標準物質網  轉載自:標準物質網  發布日期:2016-09-28 18:03:47

        細胞解凍和培養指南

        凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DMSO)后進行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會迅速下降。



        操作推薦

        ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發生。

        檢查包裝,查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。

        將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,立即復蘇培養,或迅速轉移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲。

        凍存細胞的復蘇和培養

        1、先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。(請參閱:注1)

        2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛融化,就應將細胞凍存管取出水浴。

        3、在水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布拭干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

        4、小心擰開凍存管的頂部,將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125xg),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的完全培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。

        5、將細胞培養容器置于細胞培養箱,在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養條件下進行孵育。細胞培養24小時后應在顯微鏡下觀察細胞形態和生長狀況。(請參閱:注2)

        *注1:雖然大多數細胞株可以在一種以上的培養基中生長,但細胞的特征有可能會在更換不同培養基時發生。為保證最佳效果,請從細胞培養一開始就使用ATCC推薦指定的培養基。

        *注2:某些細胞株,如雜交瘤株,可能需要幾天的時間才從凍存狀態下完全恢復正常生長。在細胞復蘇培養第一天可能會呈現較低的細胞活力并產生一些細胞碎片。度過這一時期后,細胞會恢復并進入指數增長期。

        細胞培養貼士

        細胞株的生長有兩種狀態,貼壁細胞需要附著在一個表面進行生長(貼壁依賴性),懸浮細胞可在懸浮培養狀態下生長(非貼壁依賴)。在細胞單層貼壁生長貨懸浮生長中,都通常遵循四個特征性階段:遲滯期、對數或指數期、靜止或平臺期及衰退期。


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